HELICOBACTER TEST INFAI 75 MG POR BELSŐLEGES OLDATHOZ

Farmakoterápiás csoport: Egyéb diagnosztikus szerek, ATC kód: V04CX

A kilégzési teszt során egy dózisban, 75 mg mennyiségben adott ¹³C-karbamid farmakodinamikai aktivitását nem írták le.

Orális bevitel után a jelölt karbamid eléri a gyomornyálkahártyát. Helicobacter pylori jelenlétében a

Helicobacter pylori ureáz enzime a ¹³C-karbamidot lebontja

2H2N(¹³CO)NH2 + 2H2O ^Ureázenzim 4NH3 + 2¹³CO2

A szén-dioxid diffúzió útján bejut a véráramba. Innen bikarbonát formájában a tüdőbe kerül, és ¹³CO2

formájában felszabadul a kilégzett levegővel.

Bakteriális ureáz jelenlétében a ¹³C/¹²C-szénizotópok aránya szignifikánsan megváltozik. A ¹³CO2 mennyisége a kilégzett levegőmintában nemdiszperzív infravörös spektroszkópiával határozható meg, és a 00. percben, valamint a 30. percben meghatározott értékek abszolút különbségeként (𝚫ᵝ-érték) mérik.

A gyomorban csak a Helicobacter pylori termel ureázt. A gyomorflórában csak elvétve észleltek

egyéb ureáztermelő baktériumokat.

A Helicobacter pylori-negatív és -pozitív betegek elkülönítését szolgáló határértékként a 4‰ 𝚫ᵝ-értéket adják meg. Ez azt jelenti, hogy fertőzésre a 4‰ feletti 𝚫ᵝ-érték utal. A Helicobacter pylori diagnosztizálásával összehasonlítva egy 457 betegen elvégzett klinikai vizsgálatban a kilégzési teszt szenzitivitása 96,5% és 97,9% között [95%-os KI: 94,05%-99,72%], a specificitása pedig 96,7% és

100% között [95%-os KI: 94,17%-103,63%] volt.

Bakteriális ureáz enzim hiányában, a gastrointestinalis traktusból való felszívódása után a bevitt karbamid teljes mennyisége úgy metabolizálódik, mint az endogén karbamid. A fentebb említett módon, bakteriális hidrolízis során keletkező ammónia NH4 formájában metabolizálódik.

Az orálisan bevitt ¹³C-karbamid szén-dioxiddá és ammóniává bomlik le, vagy pedig beépül a test saját karbamid-ciklusába. A ¹³CO2 bármilyen emelkedése izotóp analízis útján mérhető.

A ¹³CO2 felszívódása és disztribúciója gyorsabb, mint az ureáz-reakció. Ezért a teljes folyamatban a sebességmeghatározó lépes a ¹³C-karbamidnak a Helicobacter pylori ureáz enzimje által történő bontása.

A 75 mg izotóppal jelölt karbamid bevitele csak a Helicobacter pylori pozitív betegeknél növelte meg

szignifikánsan a 30. percben vizsgált kilégzett levegőminta ¹³CO2-tartalmát.

Nincs.

Nem alkalmazható.

3 év.

Legfeljebb 25°C-on tárolandó.

A tesztkészlet 50 tégelyt tartalmaz a következő kiegészítő komponensekkel:

1. A teszt szakember jelenlétében végzendő.

2. Minden egyes beteg adatait be kell jegyezni a mellékelt adatlapra. Javasoljuk, hogy a teszt elvégzésekor a beteg nyugalmi helyzetben legyen.

3. A teszt az alapérték (00 perces érték) meghatározásával kezdődik.

   • Vegye ki a tesztkészletből a szívószálat és a légzésmintatartályokat (csövek vagy légzőzsák), amelyeken a „Mintavétel ideje: 00 perces érték” felirat szerepel.

   • Távolítsa el a dugót az egyik légzésmintatartályból (cső vagy légzőzsák), bontsa ki a

     szívószálat és helyezze azt a tartályba.

   • Ezután a beteg a szívószálon keresztül óvatosan lélegezzen bele a légzésmintatartályba.

   • Továbbra is folyamatosan lélegezve, a betegnek ki kell húznia a szívószálat, és azonnal le

     kell zárnia a légzésmintatartályt (cső vagy légzőzsák) a dugójával.

     (Ha 30 másodpercnél hosszabb ideig nyitva marad a légzőzsák, a teszt valótlan értéket

     eredményezhet).

   • Tartsuk a mintacsövet vagy légzőzsákot függőleges helyzetben, és helyezzük fel a „00 perces érték” feliratú vonalkódos címkét a tartályra.

4. Azonos módszerrel töltsük meg a második mintatartályt is kilégzett levegővel (címke:

   „Mintavétel ideje: 00 perces érték”). Infravörös analízis esetén csak egy légzőzsákot kell használni.

5. Ezután a beteg késedelem nélkül fogyasszon el 200 ml 100%-os narancslevet vagy 1g citromsavat 200 ml vízben feloldva.

6. A következő lépés a tesztoldat elkészítése:

   • Vegyük ki a „¹³C-karbamid por” feliratú tégelyt a tesztkészletből, nyissuk fel, és töltsük fel háromnegyed részig csapvízzel.

   • Zárjuk le a tégelyt, és teljesen oldjuk fel a port a tégely óvatos rázásával. A tégely

     tartalmát ezután öntsük át egy ivópohárba.

   • Töltsük tele a „¹³C-karbamid por” feliratú tégelyt másodszor, majd harmadszor is vízzel, és tartalmát öntsük a vizespohárba (a csapvíz összmennyiségének körülbelül 30 ml-nek kell lennie).

7. A beteg a tesztoldatot annak elkészítését követően azonnal igya meg, ennek pontos időpontját

   fel kell jegyezni.

8. 30 perccel a tesztoldat elfogyasztása után (7. pont) kerül sor a „30 perces érték” mintáinak levételére a „30 perces érték” feliratú légzésmintatartályba (cső vagy légzőzsák), a 3-4. pontban leírtak alapján. Ezen utóbbi minták jelölésére a „30 perces érték” feliratú vonalkódos címke szolgál.

9. Ragasszuk fel a megfelelő vonalkódos címkét a beteg adatlapjára. Végül az öntapadó cédulával

   zárjuk le a csomagolást.

10. A légzésmintatartályokat (cső vagy légzőzsák) el kell elküldeni elemzés céljából egy minősített

laboratóriumba.

A kilégzett levegőminták infravörös analízise vagy tömegspektrometriás (IRMS) vizsgálata és a teszt

pontos leírása a laboratóriumok számára

Infravörös spektroszkópia (NDIR)

A 100 ml-es légzőzsákokban gyűjtött kilégzett levegőminták vizsgálata nemdiszperzív infravörös

spektrometriával (NDIR) történik.

A Helicobacter Test INFAI teszt szerves részét képezi a kilégzett szén-dioxid ¹³C/¹²C arányának megállapítása. A teszt torzításmentessége erősen függ a légzési analízis minőségétől. A légzési analízis teljesítményjellemzői (pl. a linearitás, a stabilitás – referenciagáz pontossága), valamint a meghatározás pontossága alapvető jelentőséggel bírnak a rendszer torzításmentessége szempontjából.

Biztosítani kell, hogy az analízist minősített laboratórium végezze el. A mérést ajánlott a mintavételt

követően minél hamarabb elvégezni, de mindenképpen 4 héten belül. A hitelesített módszer a következő:

• A minta előkészítése infravörös spektroszkópiához (NDIR)

  A légzésminták szén-dioxid-tartalmában a ¹³C/¹²C arány meghatározása közvetlenül történik a kilélegzett levegőből. Egy állítható gázpumpával a zsákokban lévő levegőt bejuttatják a NDIR spektrométerbe. A levegőminta víztartalmát a Nafion vízcsapda körülbelül állandó értéken fogja ^{tartani. A kalibrációhoz és a mérésekhez szükséges CO}2^{-mentes levegőt (zéró-gáz) az analizátorba beépített CO}2^{-abszorber állítja elő.}

• Infravörös spektroszkópiás analízis

  A lehelet szén-dioxid-tartalmának analíziséhez egy infravörös sugárforrás által kibocsátott szélessávú infravörös sugárnyalábot engednek váltakozva a mérőkamrán és a referenciakamrán át egy sugárosztó segítségével. Ezek után a modulált infravörös sugárnyaláb belép az infravörös detektorokba, melyek

  kettős rétegű transzmissziós detektorok egy elülső és egy hátsó kamrával, és mindegyik a mérendő izotóppal jelölt tiszta gázzal van töltve (az egyikben ¹³CO2, a másikban ¹²CO2). A mérőkamrában lévő gáz összetevői gyengítik az infravörös sugárzást. Ezáltal a sugárzás egyensúlyi állapota a mérő és az összehasonlító sugárnyaláb között megbomlik. Ennek következtében hőmérséklet-ingadozás jelentkezik, mely nyomásingadozást eredményez az infravörös detektor elülső kamrájában. Egy nagy ellenállású egyenáramnak kitett membrán kondenzátor csatlakozik a kamrához, amely ezeket a nyomásingadozásokat váltóárammá alakítja át, előállítva a kilélegzett levegőben jelenlévő szén-dioxid izotóp-összetételének mérhető jelét.

• A minta bejuttatása

  Egy félautomata mintavevő rendszer meghatározott mennyiségű mérendő gázt juttat be a zéró-gázba, mely az infravörös spektrométer gázkörében kering. Ez lehetővé teszi a ¹³C/¹²C arány mérését az 1% ^{feletti CO}2^{-koncentrációk esetén.}

• A ¹³C/¹²C arány meghatározására vonatkozó előírások

  A kilégzett levegő teszt a ¹³C-vel jelölt karbamid szájon át történő bevitelén alapul, amelynek enzimatikus hidrolízisét a kilégzett levegő ¹³CO2-tartalmának nemdiszperzív infravörös spektrometriás mérésével monitorozzák.

• A kilégzett levegő analízisére szolgáló infravörös spektrométer feleljen meg az alábbi

  kívánalmaknak:

  Többször ismételt analízis: Az adott minta legalább háromszor ismételt analízise a vizsgálat során Biztonságos hozzáférés Az üzemi paraméterek és az eredmények biztonságos tárolása az

  utólagos változtatások megakadályozása érdekében

  Az alapvető rendszeralkalmassági vizsgálatok a következők: linearitás, stabilitás, valamint a vizsgálat pontosságának ellenőrzése.

  A detektorok nulla pontjának beállítása a spektrométerben fejlesztett zéró-gázzal lehetséges. A detektorok végpontjának beállítása pontosan ismert koncentrációjú kalibráló gázok használatával lehetséges.

  Linearitás ^≤ 0,5‰ 1% és 7% közötti CO2 koncentrációjú kilégzett levegőminták esetén

  Stabilitás ≤ 0,3‰ tíz egymást követő pulzus során

  A vizsgálat pontossága ≤ 0,5‰ a ¹³C-re, természetes eloszlás esetén 100 ml-es légzőzsák

  használatakor, valamint a kilégzett levegő 3%-os CO2-koncentrációja mellett.

  Akkor van jelen Helicobacter pylori fertőzés, ha a ¹³C/¹²C alapértéke és a 30 perces érték közötti különbség több mint 4,0 ‰.

  Alternatív módon bármilyen más megfelelően validált módszer is használható, amelyet objektív eljárással minősített laboratórium hajt végre.

  Tömegspektrometria (IRMS)

  A 10 ml-es üveg vagy műanyag mintavételi csövekbe levett kilégzett levegőminták vizsgálata

  izotóparány tömegspektrometriával (IRMS) történik.

  A Helicobacter Test INFAI teszt szerves részét képezi a kilégzett szén-dioxid ¹³C/¹²C arányának megállapítása. A teszt torzításmentessége erősen függ a kilégzett levegő analízisének minőségétől. A kilégzett levegő analízisének teljesítményjellemzői (pl. a linearitás, a stabilitás – referenciagáz pontossága), valamint a meghatározás pontossága alapvető jelentőséggel bírnak a rendszer torzításmentessége szempontjából.

  Biztosítani kell, hogy az analízist minősített laboratórium végezze el. A hitelesített módszer a

  következő:

• A minta előkészítése (az IMRS-hez)

  A kilégzett szén-dioxid ¹³C/¹²C arányának tömegspektrometriával történő megállapításához a szén-dioxidot el kell választani a kilégzett levegőtől, és be kell juttatni a tömegspektrométerbe. Az izotóp tömegspektrométer kilélegzett levegő analízisére szolgáló automatikus mintaelőkészítő rendszerének működése folyamatos áramlású gázkromatográfiás elválasztási eljáráson alapul.

  A víz elkülönítése a mintából Nafion vízcsapdával vagy a gázkromatográfiás előkészítő rendszer segítségével történik. Ez utóbbi eluensként héliumot használva gázkromatográfiás oszlopon különíti el az egyes gázokat. Az oszlopot elhagyó, elválasztott gázfajtákat ionizációs detektor segítségével határozzák meg. A jellemző retenciós ideje alapján azonosított szén-dioxid-gáz frakció kerül bevezetésre a tömegspektrométerbe.

• A tömegspektrometriás analízis

  Az elkülönített szén-dioxid-gázminta analízise során annak molekuláit ionizálják, ionsugárrá alakítják, elektromos térben felgyorsítják, mágneses térben elhajlítják, majd detektálják. Ez az öt folyamat a tömegspektrométer analizátorában zajlik le. Az analizátor három elkülönített részből tevődik össze: az ionforrás, a repülési-cső, valamint a kollektor. Az ionizáció, az ionsugárképzés és a gyorsítás a forrásban történik, a mágneses eltérítés a repülési-csőben zajlik, míg a szén-dioxid detektálására a kollektorban kerül sor.

• A minta bejuttatása

  Különféle rendszerek állnak rendelkezésre a szén-dioxid-minta bejuttatására az analizátorba. A kilégzett levegő analízise során alapvető jelentőségű a vizsgált minta szén-dioxid tartalmának egyedi hozzámérése egy standard gázhoz. Ez biztosítja a rendszer magas fokú pontosságát, mivel ily módon a szén-dioxid izotóptartalmának kiszámítása független standarddal szemben történik.

• A ¹³C/¹²C arány meghatározására vonatkozó előírások

  A kilégzési teszt a ¹³C-vel jelölt karbamid bevitelén alapul, amelynek metabolikus lebontását a

  kilégzett levegő ¹³CO2-tartalmának mérésével monitorozzák

• A tömegspektrométerrel szemben támasztott igények:

  Többszöri ismételt analízis Az adott minta legalább háromszor ismételt analízise a vizsgálat során Biztonságos hozzáférés Az üzemi paraméterek és az eredmények biztonságos tárolása az

  utólagos változtatások megakadályozása érdekében

  Beállítás ¹³C/¹²C arány tekintettel a Pee Dee Beliminate-re (PDB)

  A minta mennyisége < 200 µl

  Az alapvető rendszeralkalmassági vizsgálatok a következők: linearitás, stabilitás (referenciagázzal kapott pontosság) valamint a vizsgálat pontosságának ellenőrzése.

• A kilégzett levegő analízisére szolgáló tömegspektrométer feleljen meg az alábbi

kívánalmaknak:

Linearitás ^≤ 0,5 ‰ 1% és 7% közötti CO2-koncentrációjú kilégzett levegőminták

esetén

Stabilitás ≤ 0,2 ‰ tíz egymást követő pulzus során

A vizsgálat pontossága ≤ 0,3 ‰ a ¹³C-re, természetes eloszlás esetén 10 ml-es mintatartály

használatakor, valamint a kilégzett levegő 3%-os CO2-koncentrációja mellett.

Akkor van jelen Helicobacter pylori fertőzés, ha a ¹³C/¹²C alapértéke és a 30 perces érték közötti különbség több mint 4,0 ‰.

Alternatív módon bármilyen más megfelelően validált módszer is használható, amelyet objektív eljárással minősített laboratórium hajt végre.