HELICOBACTER TEST INFAI 3-11 ÉVES GYERMEKEKNEK, 45 MG POR BELSŐLEGES OLDATHOZ

Farmakoterápiás csoport: Egyéb diagnosztikus szerek, ATC kód: V04CX

A kilégzési teszt során egy dózisban, 45 mg mennyiségben adott ¹³C-karbamid farmakodinamikai aktivitását nem írták le.

Orális bevitel után a jelölt karbamid eléri a gyomornyálkahártyát. Helicobacter pylori jelenlétében a

Helicobacter pylori ureáz enzime a ¹³C-karbamidot lebontja

2H2N(¹³CO)NH2 + 2H2O ^Ureázenzim 4NH3 + 2¹³CO2

A szén-dioxid diffúzió útján bejut a véráramba. Innen bikarbonát formájában a tüdőbe kerül, és ¹³CO2

formájában felszabadul a kilégzett levegővel.

Bakteriális ureáz jelenlétében a ¹²C/¹³C-szénizotópok aránya szignifikánsan megváltozik. A ¹³CO2 mennyisége a kilégzett levegőmintában izotóparány tömegspektrometria (IRMS) módszerrel határozható meg, és a 00. percben, valamint a 30. percben meghatározott értékek abszolút különbségeként (𝚫ᵝ-érték) mérik.

A gyomorban csak a Helicobacter pylori termel ureázt. A gyomorflórában csak elvétve észleltek

egyéb ureáztermelő baktériumokat.

A Helicobacter pylori-negatív és -pozitív betegek elkülönítését szolgáló határértékként a 4‰ 𝚫ᵝ-értéket adják meg. Ez azt jelenti, hogy fertőzésre a 4‰ feletti 𝚫ᵝ-érték utal. A Helicobacter pylori diagnosztizálásával összehasonlítva egy 168, 3–11 éves korú betegen elvégzett klinikai vizsgálatban a kilégzési teszt szenzitivitása 98,4% [90%-os KI: ≥ 93,9%], specificitása pedig 98,1% [90%-os KI:

≥ 95,1%] volt.

Bakteriális ureáz enzim hiányában, a gastrointestinalis traktusból való felszívódása után a bevitt karbamid teljes mennyisége úgy metabolizálódik, mint az endogén karbamid. A fentebb említett módon, bakteriális hidrolízis során keletkező ammónia NH4 formájában metabolizálódik.

Az orálisan bevitt ¹³C-karbamid szén-dioxiddá és ammóniává bomlik le, vagy pedig beépül a test saját karbamidciklusába. A ¹³CO2 bármilyen emelkedése izotóp analízis útján mérhető.

A ¹³CO2 felszívódása és disztribúciója gyorsabb, mint az ureáz-reakció. Ezért a teljes folyamatban a sebességmeghatározó lépes a ¹³C-karbamidnak a Helicobacter pylori ureáz enzimje által történő bontása.

A 45 mg izotóppal jelölt karbamid bevétele csak a Helicobacter pylori-pozitív betegeknél növelte meg

szignifikánsan a 30. percben vizsgált kilégzett levegőminta ¹³CO2-tartalmát.

Nincs.

Nem alkalmazható.

3 év.

Legfeljebb 25°C-on tárolandó.

A tesztkészlet az alábbi összetevőkből áll:

1. A teszt szakember jelenlétében végzendő.

2. Minden egyes beteg adatait be kell jegyezni a mellékelt adatlapra. Javasoljuk, hogy a teszt elvégzésekor a beteg nyugalmi helyzetben legyen.

3. A teszt az alapérték (00 perces érték) meghatározásával kezdődik.

   • Vegye ki a tesztkészletből a szívószálat, valamint a két

     „Mintavétel ideje: 00 perces érték” feliratú mintavételi csövet.

   • Távolítsa el a dugót az egyik mintavételi csőből, bontsa ki a szívószálat és helyezze azt a

     tartályba.

   • Ezután a beteg lélegezzen a szívószálon keresztül mindaddig, amíg a mintavételi cső belső oldala be nem párásodik.

   • Továbbra is folyamatosan lélegezve, a betegnek ki kell húzni a szívószálat, és azonnal le

     kell zárni a mintavételi csövet a dugójával.

     (Ha 30 másodpercnél hosszabb ideig nyitva marad a mintavételi cső, a teszt valótlan

     értéket eredményezhet).

   • Tartsuk a mintavételi csövet függőleges helyzetben, és ragasszuk fel a csőre körben a „00 perces érték” feliratú vonalkódos címkét oly módon, hogy a vonalkód vonalai vízszintesen álljanak.

4. Azonos módszerrel töltsük meg a második mintavételi csövet (Címke: „Mintavétel ideje: 00

   perces érték”) is kilégzett levegővel.

5. Ezután a beteg késedelem nélkül fogyasszon el 100 ml 100%-os narancslevet.

6. A következő lépés a tesztoldat elkészítése:

   • Vegyük ki a „¹³C-karbamidpor” feliratú tégelyt a tesztkészletből, nyissuk meg, és töltsük fel háromnegyed részig csapvízzel.

   • Zárjuk le a tégelyt, és teljesen oldjuk fel a port a tégely óvatos rázásával. A tégely

     tartalmát ezután öntsük át egy ivópohárba.

   • Töltsük tele a „¹³C-karbamidpor” feliratú tégelyt másodszor, majd harmadszor is vízzel, és tartalmát öntsük a vizespohárba (a csapvíz összmennyiségének körülbelül 30 ml-nek kell lennie).

7. A beteg a tesztoldatot annak elkészítését követően azonnal igya meg, és ennek pontos időpontját

   fel kell jegyezni.

8. 30 perccel a tesztoldat elfogyasztása után (7. pont) kerül sor a „30 perces érték” mintáinak levételére a tesztkészletben maradt két, „30 perces érték” feliratú tartályba, a 3. és 4. pontban leírtak alapján. Ezen utóbbi minták jelölésére a „30 perces érték” feliratú vonalkódos címke szolgál.

9. Ragasszuk fel a megfelelő vonalkódos címkét a beteg adatlapjára. Végül az öntapadó cédulával

   zárjuk le a csomagolást.

10. A mintavételi csöveket az eredeti csomagolásban kell elküldeni elemzés céljából egy minősített

laboratóriumba.

A kilégzett levegőminták analízise és a teszt pontos leírása a laboratóriumok számára

A 10 ml-es üveg vagy műanyag mintavételi csövekbe levett kilégzett levegőminták elemzése

izotóparány tömegspektrométerrel (IRMS) történik.

A Helicobacter Test INFAI teszt szerves részét képezi a kilégzett szén-dioxid ¹³C/¹²C arányának megállapítása. A teszt torzításmentessége erősen függ a kilégzett levegő analízisének minőségétől. A levegő analízisének teljesítményjellemzői (pl. a linearitás, a stabilitás – referenciagáz pontossága), valamint a meghatározás pontossága alapvető jelentőséggel bírnak a rendszer torzításmentessége szempontjából.

Biztosítani kell, hogy az analízist minősített laboratórium végezze el. A hitelesített módszer a következő:

• A minta előkészítése (IRMS)

  A kilégzett szén-dioxid ¹³C/¹²C arányának tömegspektrometriával történő megállapításához a szén-dioxidot el kell választani a kilégzett levegőtől, és be kell juttatni a tömegspektrométerbe. Az izotóp tömegspektrométer kilélegzett levegő analízisére szolgáló automatikus mintaelőkészítő rendszerének működése folyamatos áramlású gázkromatográfiás elválasztási eljáráson alapul.

  A víz elkülönítése a mintából a Nafion vízcsapda vagy a gázkromatográfiás preparációs rendszer

  segítségével történik. Ez utóbbi eluensként héliumot használva gázkromatográfiás oszlopon különíti el az egyes gázokat. Az oszlopot elhagyó, elválasztott gázfajtákat ionizációs detektor segítségével határozzák meg. A jellemző retenciós ideje alapján azonosított szén-dioxid-gáz frakció kerül bevezetésre a tömegspektrométerbe.

• A tömegspektrometriás analízis

  Az elkülönített szén-dioxid-gázminta analízise során annak molekuláit ionizálják, ionsugárrá alakítják, elektromos térben felgyorsítják, mágneses térben elhajlítják, majd detektálják. Ez az öt folyamat a tömegspektrométer analizátorában zajlik le. Az analizátor három önálló részből tevődik össze: az ionforrás, a repülési-cső, valamint a kollektor. Az ionizáció, az ionsugárképzés és a gyorsítás a forrásban történik, a mágneses eltérítés a repülési-csőben zajlik, míg a szén-dioxid detektálására a kollektorban kerül sor.

• A minta bejuttatása

  Különféle rendszerek állnak rendelkezésre a szén-dioxid-minta bejuttatására az analizátorba. A kilégzett levegő analízise során alapvető jelentőségű a vizsgált minta szén-dioxid tartalmának egyedi hozzámérése egy standard gázhoz. Ez biztosítja a rendszer magas fokú pontosságát, mivel ily módon a szén-dioxid izotóptartalmának kiszámítása független standarddal szemben történik.

• A ¹³C/¹²C arány meghatározására vonatkozó előírások

  A kilégzett levegő teszt a ¹³C-vel jelölt karbamid bevitelén alapul, amelynek metabolikus lebontását a

  kilégzett levegő ¹³CO2-tartalmának mérésével monitorozzák.

• A tömegspektrométerrel szemben támasztott igények:

  Többszöri ismételt analízis Az adott minta legalább háromszor ismételt analízise a vizsgálat során Biztonságos hozzáférés Az üzemi paraméterek és az eredmények biztonságos tárolása az

  utólagos változtatások megakadályozása érdekében

  Beállítás ¹³C/¹²C arány tekintettel a Pee Dee Beliminate-re (PDB)

  A minta mennyisége < 200 µl

  Az alapvető rendszeralkalmassági vizsgálatok a következők: linearitás, stabilitás (referenciagázzal kapott pontosság) valamint a vizsgálat pontosságának ellenőrzése.

• A kilégzett levegő analízisére szolgáló tömegspektrométer feleljen meg az alábbi

kívánalmaknak:

Linearitás ^≤ 0,5‰ 1% és 7% közötti CO2 koncentrációjú kilégzett levegőminták

esetén

Stabilitás ≤ 0,2‰ tíz egymást követő pulzus során

A vizsgálat pontossága ≤ 0,3‰ a ¹³C-re, természetes eloszlás esetén 10 ml-es mintatartály

használatakor valamint a kilégzett levegő 3%-os CO2 koncentrációja mellett.

Akkor van jelen Helicobacter pylori fertőzés, ha a ¹³C/¹²C alapértéke és a 30 perces érték közötti különbség több, mint 4,0‰.

Alternatív módon bármilyen más, megfelelően validált módszer is használható, amelyet objektív eljárással minősített laboratórium hajt végre.