HELICOBACTER TEST INFAI (13 C UREA) PD.ORA.SOL 45MG/JAR

Φαρμακοθεραπευτική ομάδα: Άλλος διαγνωστικός παράγοντας, ATC-code: VO4CX

Για την ποσότητα των 45 mg ¹³C-ουρίας, που χορηγείται ανά μονάδα στη διάρκεια της δοκιμασίας αναπνοής, δεν περιγράφεται φαρμακοδυναμική δραστηριότητα.

Μετά τη λήψη από το στόμα η συγκεκριμένη ουρία φτάνει στο γαστρική βλεννώδη μεμβράνη. Με την παρουσία του βακτηριδίου Helicobacter pylori η ¹³C-ουρία μεταβολίζεται από το ένζυμο ουρεάση του Helicobacter pylori.

2H2N(¹³CO)NH2 + 2H2O ^{Ένζυμο ουρεάση} 4NH3 + 2¹³CO2

Το διοξείδιο του άνθρακα διαχέεται στα αιμοφόρα αγγεία. Από εκεί μεταφέρεται με δισανθρακική μορφή στους πνεύμονες και ελευθερώνεται στον εκπνεόμενο αέρα ως ¹³CO2.

Με την παρουσία βακτηριακής ουρεάσης ο λόγος των ισοτόπων άνθρακα ¹³C/¹²C διαφοροποιείται ^{σημαντικά. Η αναλογία των μορίων13CO}2 ^{στα δείγματα αναπνοής προσδιορίζεται με τη μέθοδο της}

«φασματογραφίας μάζας λόγου ισοτόπων» (isotope-ratio-mass-spectrometry ή IRMS) και δηλώνεται

ως απόλυτη διαφορά (τιμή 𝚫ᵝ) μεταξύ των τιμών «00 λεπτών» και «30 λεπτών».

Η ουρεάση παράγεται στο στομάχι μόνο από το βακτηρίδιο Helicobacter pylori. Άλλα βακτήρια που παράγουν ουρεάση σπάνια έχουν βρεθεί στο γαστρικό περιβάλλον.

Το κρίσιμο σημείο για τη διάκριση αρνητικού και θετικού αποτελέσματος ως προς την παρουσία του βακτηριδίου Helicobacter pylori, καθορίζεται στην τιμή 4‰ για τη διαφορά 𝚫ᵝ, γεγονός που σημαίνει ότι η αύξηση της τιμής 𝚫ᵝ κατά ποσοστό μεγαλύτερο από 4‰ δηλώνει λοίμωξη. Σε σύγκριση με βιοπτικές μεθόδους διάγνωσης λοίμωξης από το βακτηρίδιο Helicobacter pylori, η δοκιμασία αναπνοής πέτυχε, σε κλινικές δοκιμές σε 168 ασθενείς ηλικίας 3 – 11 ετών, ευαισθησία 98,4% [90%-CI: ≥93,9%] και ιδιαιτερότητα 98,1% [90%-CI: ≥95,1%].

Σε περίπτωση απουσίας βακτηριακής ουρεάσης, όλη η ποσότητα της ουρίας που χορηγήθηκε θα μεταβολισθεί μετά την απορρόφησή της στη γαστρεντερική περιοχή, όπως και η ενδογενής ουρία. Η αμμωνία που παράγεται κατά τη βακτηριακή υδρόλυση που περιγράφεται παραπάνω συμμετέχει στο μεταβολισμό ως NH⁴⁺.

Η στοματικά παρεχόμενη ¹³C-ουρία μεταβολίζεται σε διοξείδιο του άνθρακα και αμμωνία ή ενσωματώνεται στον κύκλο ουρίας του οργανισμού. Κάθε αύξηση σε ¹³CΟ2 θα μετρηθεί με την ισοτοπική ανάλυση.

Η απορρόφηση και κατανομή του ¹³CO2 είναι γρηγορότερη από την αντίδραση της ουρεάσης. Επομένως, το περιοριστικό βήμα σε όλη τη διαδικασία είναι η διάσπαση της ¹³C-ουρίας από την ουρεάση του Helicobacter.

Μόνο σε θετικούς ως προς Helicobacter pylori ασθενείς η χορήγηση 45 mg συγκεκριμένης ουρίας οδηγεί σε σημαντική αύξηση των μορίων ¹³CO2 στο δείγμα αναπνοής μέσα στα πρώτα 30 λεπτά.

Κανένα

Δεν ισχύει

3 χρόνια

Μη φυλάσσετε πάνω από 25°C.

Κάθε συσκευασία της δοκιμασίας περιέχει τα εξής μέρη:

και άλλος χειρισμός

1. Η δοκιμασία πρέπει να διεξάγεται με τη παρουσία ειδικευμένου ατόμου.

2. Τα στοιχεία κάθε ασθενή πρέπει να καταγράφονται σύμφωνα με το παρεχόμενο φύλλο δεδομένων για τεκμηρίωση του ασθενούς. Συνιστάται η διενέργεια της δοκιμασίας με τον ασθενή σε θέση ανάπαυσης.

3. Η δοκιμασία ξεκινά με τη συλλογή δειγμάτων για τον καθορισμό της αρχικής τιμής («τιμή 00 λεπτών»):

   • Βγάλτε από τη συσκευασία της δοκιμασίας το σωληνάριο και τα δύο δοχεία δείγματος με ετικέτα: «Sampling time: 00-minute-value» (Χρόνος δειγματοληψίας: τιμή 00 λεπτών).

   • Αφαιρέστε το επιστόμιο σε ένα από τα δύο δοχεία δείγματος, βγάλτε το περιτύλιγμα από το σωληνάριο και τοποθετήστε το σωληνάριο στο δοχείο.

   • Ο ασθενής πρέπει στη συνέχεια να εκπνεύσει ομαλά μέσα από το σωληνάριο μέχρι να ανέβει η εσωτερική επιφάνεια του δοχείου δείγματος.

   • Συνεχίζοντας να εκπνέει ο ασθενής, βγάλτε το σωληνάριο και αμέσως κλείστε το επιστόμιο στο δοχείο.

     (Αν το δοχείο δείγματος παραμείνει ανοικτό για περισσότερο από 30 δευτερόλεπτα, το αποτέλεσμα της δοκιμασίας κινδυνεύει να νοθευτεί.)

   • Κρατήστε το δοχείο δείγματος σε όρθια θέση και κολλήστε την ετικέτα με το γραμμωτό κώδικα (barcode) με ένδειξη «00-minute-value» (τιμή 00 λεπτών) κυκλικά στο δοχείο δείγματος, έτσι ώστε οι γραμμές του γραμμωτού κώδικα να είναι οριζόντιες.

4. Πάρτε δείγμα της εκπνοής στο δεύτερο δοχείο δείγματος με ετικέτα «Sampling time: 00-minute-value» (τιμή 00 λεπτών), ακολουθώντας την ίδια διαδικασία.

5. Ο ασθενής πρέπει τώρα να πιει 100 ml χυμού πορτοκαλιού 100% χωρίς καθυστέρηση.

6. Ακολουθεί η προετοιμασία του διαλύματος της δοκιμασίας:

   • Βγάλτε από τη συσκευασία της δοκιμασίας το βάζο με επιγραφή «¹³C-ουρία powder» (σκόνη ¹³C-ουρίας), ανοίξτε το και γεμίστε το μέχρι τα τρία τέταρτα του όγκου του με νερό από τη βρύση.

   • Κλείστε το βάζο και ανακινήστε το προσεκτικά μέχρι να διαλυθεί τελείως η σκόνη. Αδειάστε το περιεχόμενο σε ένα ποτήρι.

   • Γεμίστε το βάζο ¹³C-ουρίας μέχρι το χείλος με νερό για δεύτερη και τρίτη φορά και αδειάστε το νερό στο ποτήρι (ο συνολικός όγκος νερού πρέπει να είναι περίπου 30 ml).

7. Αυτό το διάλυμα της δοκιμασίας πρέπει τώρα να το πιει αμέσως ο ασθενής και να καταγράψετε το χρόνο που αυτό συμβαίνει.

8. Τριάντα λεπτά μετά τη λήψη του διαλύματος (βήμα 7), συλλέξτε τα δείγματα για την τιμή 30 λεπτών στα δύο δοχεία που απομένουν στη συσκευασία της δοκιμασίας και έχουν την ετικέτα

   «Sampling time: 30-minute-value» (τιμή 30 λεπτών), όπως περιγράφεται στα βήματα 3 ως 4. Χρησιμοποιήστε τις ετικέτες με γραμμωτό κώδικα με ένδειξη «30-minute-value» για αυτά τα δείγματα.

9. Κολλήστε την αντίστοιχη ετικέτα με γραμμωτό κώδικα στο φύλλο δεδομένων για τεκμηρίωση του ασθενούς. Τελικά, σφραγίστε τη συσκευασία με το αυτοκόλλητο.

10. Τα δοχεία των δειγμάτων πρέπει να αποσταλούν μέσα στην αρχική συσκευασία για ανάλυση σε εξειδικευμένο εργαστήριο.

    Ανάλυση των δειγμάτων αναπνοής και προδιαγραφές δοκιμών για εργαστήρια

    Τα δείγματα αναπνοής που συλλέγονται σε γυάλινα ή πλαστικά δοχεία των 10 ml ή σε αναπνευστικές σακούλες των 100 ml, αναλύονται με τη μέθοδο της φασματογραφίας μάζας λόγου ισοτόπων (Isotope Ratio Mass Spectrometry ή IRMS).

    Η ανάλυση του λόγου ¹³C/¹²C στο διοξείδιο του άνθρακα της εκπνοής είναι ένα αναπόσπαστο μέρος του διαγνωστικής δοκιμασίας του Helicobacter Test INFAI για παιδιά ηλικίας 3-11 ετών. Η ακρίβεια της δοκιμασίας εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την ποιότητα ανάλυσης των αερίων εκπνοής. Οι προδιαγραφές των παραμέτρων του φασματογράφου μάζας, όπως γραμμικότητα, σταθερότητα (ακρίβεια αερίου αναφοράς) και ακρίβεια μέτρησης είναι θεμελιώδη για την ακρίβεια του συστήματος.

    Πρέπει να διασφαλιστεί ότι η ανάλυση πραγματοποιείται σε εξειδικευμένα εργαστήρια. Η μέθοδος αξιολόγησης της εφαρμογής έχει ως ακολούθως:

    • Προετοιμασία δειγμάτων για IRMS

      Για τον προσδιορισμό του λόγου ¹³C/¹²C στο διοξείδιο του άνθρακα της εκπνοής με φασματογράφο μάζας, το διοξείδιο του άνθρακα πρέπει να διαχωριστεί από τα αέρια εκπνοής και να εισαχθεί στο φασματογράφο μάζας. Το σύστημα αυτόματης προετοιμασίας για φασματογράφο μάζας ισοτόπων, σχεδιασμένο ειδικά για ανάλυση δειγμάτων αναπνοής, βασίζεται σε διαχωρισμό με αεριο-χρωματογραφική τεχνική συνεχούς ροής.

      Το νερό απομακρύνεται από το δείγμα μέσω μιας παγίδας νερού Nafion ή μέσω αεριο-χρωματογραφικού συστήματος προετοιμασίας που διαχωρίζει τα διαφορετικά αέρια σε μια χρωματογραφική στήλη αερίων με έκλουση με Ήλιο. Με τη διέλευσή τους από τη στήλη, τα διαχωρισθέντα είδη αερίων της αναπνοής ανιχνεύονται από έναν ανιχνευτή ιονισμού. Η ποσότητα του αερίου διοξειδίου του άνθρακα, που προσδιορίζεται από το χαρακτηριστικό χρόνο κατακράτησής του, εισάγεται στο φασματογράφο μάζας.

    • Ανάλυση φασματογράφου μάζας

      Για να γίνει ανάλυση του διαχωρισθέντος δείγματος αερίου διοξειδίου του άνθρακα, τα μόρια του δείγματος πρέπει να ιονισθούν, να σχηματίσουν μια δέσμη, να επιταχυνθούν σε ηλεκτρικό πεδίο, να παρεκτραπούν σε μαγνητικό πεδίο και τελικά να γίνει ανίχνευσή τους. Αυτές οι πέντε διαδικασίες συμβαίνουν στον αναλυτή του φασματογράφου μάζας, που αποτελείται από τρία χωριστά τμήματα: την πηγή, το σωλήνα διέλευσης, και το συλλέκτη. Ο ιονισμός, η διαμόρφωση της δέσμης και η επιτάχυνση συμβαίνουν όλα στην πηγή, η μαγνητική παρεκτροπή συμβαίνει στο σωλήνα διέλευσης και η ανίχνευση συμβαίνει στο συλλέκτη.

    • Εισαγωγή δείγματος

      Για την εισαγωγή του διοξειδίου του άνθρακα στον αναλυτή, υπάρχουν διαθέσιμα πολλά συστήματα εισαγωγής δείγματος. Για την ανάλυση δείγματος αναπνοής, είναι ουσιώδης η χωριστή ισοστάθμιση του διοξειδίου του άνθρακα του δείγματος ως προς ένα πρότυπο αέριο αναφοράς. Με τον τρόπο αυτό διασφαλίζεται η υψηλή ακρίβεια του συστήματος αυτού, καθώς ο υπολογισμός του περιεχομένου ισοτόπων στο διοξείδιο του άνθρακα γίνεται σε σχέση με ένα ανεξάρτητο πρότυπο.

    • Προδιαγραφές για τον προσδιορισμό του λόγου ¹³C/¹²C

Η αρχή της δοκιμασίας αναπνοής βασίζεται στη χορήγηση από το στόμα μιας ειδικής ουρίας με άτομα ¹³C της οποίας τα αποτελέσματα μεταβολισμού παρακολουθούνται με μέτρηση των μορίων ¹³CO2 στα αέρια της εκπνοής.

Ο φασματογράφος μάζας πρέπει να έχει τις εξής δυνατότητες:

Πολλαπλή επαναληπτική ανάλυση: Τουλάχιστον 3 επαναληπτικές αναλύσεις στο ίδιο δείγμα κατά τη λειτουργία

Ασφάλεια πρόσβασης: Αποθήκευση των παραμέτρων λειτουργίας και των αποτελεσμάτων με

ασφάλεια πρόσβασης ώστε να αποφεύγεται τροποποίησή τους στη συνέχεια

Ρύθμιση: Λόγος ¹³C/¹²C σε σχέση με PDB (Pee Dee Beliminate)

Βρόχος δείγματος: < 200 µl

Οι κύριες δοκιμές για την επαλήθευση των προδιαγραφών είναι γραμμικότητα, σταθερότητα (ακρίβεια αερίου αναφοράς) και ακρίβεια μέτρησης.

Όλοι οι φασματογράφοι μάζας για ανάλυση των αερίων αναπνοής πρέπει να τηρούν τις εξής προδιαγραφές:

Γραμμικότητα: ^≤ 0,5‰ για δείγματα αναπνοής με συγκέντρωση CO2 μεταξύ 1% και

7%

Σταθερότητα: ≤ 0,2‰ σε 10 διαδοχικούς παλμούς

Ακρίβεια μέτρησης: ≤ 0,3‰ για ¹³C σε φυσική ισοτοπική αφθονία χρησιμοποιώντας δοχείο

δείγματος αναπνοής 10ml με συγκέντρωση CO2 3% στην αναπνοή

Διαπιστώνεται λοίμωξη από βακτηρίδια Helicobacter pylori, αν η διαφορά του λόγου ¹³C/¹²C μεταξύ της αρχικής τιμής και της τιμής «30 λεπτών» υπερβαίνει το ποσοστό 4,0‰.

Εναλλακτικά, μπορεί να χρησιμοποιηθεί οποιαδήποτε άλλη κατάλληλη έγκυρη μέθοδος, που εφαρμόζεται από ένα αντικειμενικά πιστοποιημένο εργαστήριο.