HELICOBACTER TEST INFAI (13 C ΟΥΡΙΑ) PD.ORA.SOL 75MG/JAR

Φαρμακοθεραπευτική ομάδα: Άλλος διαγνωστικός παράγοντας, ATC-code: VO4CX

Για την ποσότητα των 75 mg ¹³C-ουρίας, που χορηγείται ανά μονάδα στη διάρκεια της δοκιμασίας αναπνοής, δεν περιγράφεται φαρμακοδυναμική δραστηριότητα.

Μετά τη λήψη από το στόμα η συγκεκριμένη ουρία φτάνει στο γαστρική βλεννώδη μεμβράνη. Με την παρουσία του βακτηριδίου Helicobacter pylori η ¹³C-ουρία μεταβολίζεται από το ένζυμο ουρεάση του Helicobacter pylori.

2H2N(¹³CO)NH2 + 2H2O ^{Ένζυμο ουρεάση} 4NH3 + 2¹³CO2

Το διοξείδιο του άνθρακα διαχέεται στα αιμοφόρα αγγεία. Από εκεί μεταφέρεται με δισανθρακική μορφή στους πνεύμονες και ελευθερώνεται στον εκπνεόμενο αέρα ως ¹³CO2.

Με την παρουσία βακτηριακής ουρεάσης ο λόγος των ισοτόπων άνθρακα ¹³C/¹²C διαφοροποιείται ^{σημαντικά. Η αναλογία των μορίων13CO}2 ^{στα δείγματα αναπνοής προσδιορίζεται με τη μέθοδο της} φασματογραφία υπερύθρων μη-διασποράς (Non- Dispersive InfraRed spectrometry ή NDIR).και δηλώνεται ως απόλυτη διαφορά (τιμή 𝚫ᵝ) μεταξύ των τιμών «00 λεπτών» και «30 λεπτών».

Η ουρεάση παράγεται στο στομάχι μόνο από το βακτηρίδιο Helicobacter pylori. Άλλα βακτήρια που παράγουν ουρεάση σπάνια έχουν βρεθεί στο γαστρικό περιβάλλον.

Το κρίσιμο σημείο για τη διάκριση αρνητικού και θετικού αποτελέσματος ως προς την παρουσία του βακτηριδίου Helicobacter pylori, καθορίζεται στην τιμή 4‰ για τη διαφορά 𝚫ᵝ, γεγονός που σημαίνει ότι η αύξηση της τιμής 𝚫ᵝ κατά ποσοστό μεγαλύτερο από 4‰ δηλώνει λοίμωξη. Σε σύγκριση με βιοπτικές μεθόδους διάγνωσης λοίμωξης από το βακτηρίδιο Helicobacter pylori, η δοκιμασία αναπνοής πέτυχε σε κλινικές δοκιμές σε 457 ασθενείς, ευαισθησία 96,5 %-97,9 % [95 %-CI: 94,05 %-

99,72 %] και ιδιαιτερότητα 96,7 %-100 % [95 %-CI: 94,17 %-103,63 %].

Σε περίπτωση απουσίας βακτηριακής ουρεάσης, όλη η ποσότητα της ουρίας που χορηγήθηκε θα μεταβολισθεί μετά την απορρόφησή της στη γαστρεντερική περιοχή, όπως και η ενδογενής ουρία. Η αμμωνία που παράγεται κατά τη βακτηριακή υδρόλυση που περιγράφεται παραπάνω συμμετέχει στο μεταβολισμό ως NH⁴⁺.

Η στοματικά παρεχόμενη ¹³C-ουρία μεταβολίζεται σε διοξείδιο του άνθρακα και αμμωνία ή ενσωματώνεται στον κύκλο ουρίας του οργανισμού. Κάθε αύξηση σε ¹³CΟ2 θα μετρηθεί με την ισοτοπική ανάλυση.

Η απορρόφηση και κατανομή του ¹³CO2 είναι γρηγορότερη από την αντίδραση της ουρεάσης. Επομένως, το περιοριστικό βήμα σε όλη τη διαδικασία είναι η διάσπαση της ¹³C-ουρίας από την ουρεάση του Helicobacter.

Μόνο σε θετικούς ως προς Helicobacter pylori ασθενείς η χορήγηση 75 mg συγκεκριμένης ουρίας οδηγεί σε σημαντική αύξηση των μορίων ¹³CO2 στο δείγμα αναπνοής μέσα στα πρώτα 30 λεπτά.

Κανένα

Δεν εφαρμόζεται

3 χρόνια

Μη φυλάσσετε πάνω από 25°C.

Ένα σύστημα του τεστ περιέχει 50 βάζα με τα πρόσθετα εξαρτήματα:

και άλλος χειρισμός

1. Η δοκιμασία πρέπει να διεξάγεται με τη παρουσία ειδικευμένου ατόμου.

2. Τα στοιχεία κάθε ασθενή πρέπει να καταγράφονται σύμφωνα με το παρεχόμενο φύλλο δεδομένων για τεκμηρίωση του ασθενούς. Συνιστάται η διενέργεια της δοκιμασίας με τον ασθενή σε θέση ανάπαυσης.

3. Η δοκιμασία ξεκινά με τη συλλογή δειγμάτων για τον καθορισμό της αρχικής τιμής («τιμή 00 λεπτών»):

   • Βγάλτε από τη συσκευασία της δοκιμασίας το σωληνάριο και τους περιέκτες αναπνοής (δοχεία ή αναπνευστική σακούλα) με ετικέτα: «Sampling time: 00-minute-value» (Χρόνος δειγματοληψίας: τιμή 00 λεπτών).

   • Βγάλτε το επιστόμιο από τους περιέκτες αναπνοής (δοχείο ή αναπνευστική σακούλα), βγάλτε το περιτύλιγμα από το σωληνάριο και τοποθετήστε το σωληνάριο στον περιέκτη.

   • Ο ασθενής πρέπει στη συνέχεια να εκπνεύσει ομαλά μέσα από το σωληνάριο στον περιέκτη αναπνοής.

   • Ενώ ο ασθενής συνεχίζει να εκπνέει, βγάλτε το σωληνάριο από το περιέκτη αναπνοής και αμέσως σφραγίστε τον περιέκτη αναπνοής (δοχείο ή αναπνευστική σακούλα) με το επιστόμιό του.

     (Αν ο περιέκτης αναπνοής παραμείνει ανοικτός για περισσότερο από 30 δευτερόλεπτα, το αποτέλεσμα της δοκιμασίας κινδυνεύει να αλλοιωθεί.)

   • Κρατήστε το δοχείο δείγματος ή την αναπνευστική σακούλα σε όρθια θέση και κολλήστε στον περιέκτη την ετικέτα με το γραμμωτό κώδικα (barcode) με ένδειξη «00-minute-value» (τιμή 00 λεπτών).

4. Πάρτε δείγμα της εκπνοής στο δεύτερο δοχείο δείγματος [με ετικέτα «Sampling time:

   00-minute-value» (τιμή 00 λεπτών], ακολουθώντας την ίδια διαδικασία. Για την ανάλυση υπερύθρων, χρησιμοποιείται μόνο μία αναπνευστική σακούλα.

5. Τώρα πρέπει ο ασθενής να πιει χωρίς καθυστέρηση 200 ml χυμού πορτοκαλιού 100 % ή 1 g κιτρικού οξέος διαλυμένο σε 200 ml νερού.

6. Ακολουθεί η προετοιμασία του διαλύματος της δοκιμασίας:

   • Βγάλτε από τη συσκευασία της δοκιμασίας το βάζο με επιγραφή «¹³C-urea powder» (σκόνη ¹³C-ουρίας), ανοίξτε το και γεμίστε το μέχρι τα τρία τέταρτα του όγκου του με νερό από τη βρύση.

   • Κλείστε το βάζο και ανακινήστε το προσεκτικά μέχρι να διαλυθεί εντελώς όλη η σκόνη. Αδειάστε το περιεχόμενο σε ένα ποτήρι.

   • Γεμίστε το βάζο ¹³C-ουρίας μέχρι το χείλος με νερό για δεύτερη και τρίτη φορά και αδειάστε το νερό στο ποτήρι (ο συνολικός όγκος νερού πρέπει να είναι περίπου 30 ml).

7. Αυτό το διάλυμα της δοκιμασίας πρέπει να το πιει αμέσως ο ασθενής και να σημειωθεί ο χρόνος λήψης.

8. Τριάντα λεπτά μετά τη λήψη του διαλύματος (σημείο 7), συλλέξτε τα δείγματα για την τιμή 30 λεπτών στον περιέκτη αναπνοής (δοχείο ή αναπνευστικές σακούλες) [ετικέτα «Sampling time: 30-minute-value» (Χρόνος δειγματοληψίας: τιμή 30 λεπτών)], όπως περιγράφεται στα βήματα 3 ως 4. Χρησιμοποιήστε τις ετικέτες με γραμμωτό κώδικα με ένδειξη «30-minute-value» (τιμή 30 λεπτών) για αυτά τα δείγματα.

9. Κολλήστε την αντίστοιχη ετικέτα με γραμμωτό κώδικα στο φύλλο δεδομένων για τεκμηρίωση του ασθενούς. Τέλος, σφραγίστε τη συσκευασία με το αυτοκόλλητο.

10. Οι περιέκτες αναπνοής (δοχείο ή αναπνευστικές σακούλες) πρέπει να αποσταλούν για ανάλυση σε εξειδικευμένο εργαστήριο.

Ανάλυση των δειγμάτων αναπνοής και προδιαγραφές δοκιμών για τα εργαστήρια για αναλυτή υπερύθρων ή φασματογραφία μάζας (IRMS)

Φασματογραφία υπερύθρων (NDIR)

Τα δείγματα αναπνοής που συλλέγονται σε αναπνευστικές σακούλες των 100 ml, αναλύονται από φασματογραφία υπερύθρων μη-διασποράς (Non- Dispersive InfraRed spectrometry ή NDIR).

Η ανάλυση του λόγου ¹³C/¹²C στο διοξείδιο του άνθρακα της εκπνοής είναι ένα αναπόσπαστο μέρος του διαγνωστικής δοκιμασίας του Helicobacter Test INFAI. Η ακρίβεια της δοκιμασίας εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την ποιότητα ανάλυσης των αερίων εκπνοής. Ο προσδιορισμός των παραμέτρων ανάλυσης της ανάπνοης, όπως γραμμικότητα, σταθερότητα (ακρίβεια αερίου αναφοράς) και ακρίβεια μέτρησης είναι θεμελιώδη για την ακρίβεια του συστήματος.

Πρέπει να διασφαλιστεί ότι η ανάλυση πραγματοποιείται σε εξειδικευμένα εργαστήρια. Συνίσταται η μέτρηση να γίνεται μετά τη συλλογή των δειγμάτων αναπνοής το γρηγορότερο δυνατό και σε καμία περίπτωση όχι αργότερα από 4 εβδομάδες.

Η μέθοδος αξιολόγησης της εφαρμογής έχει ως ακολούθως:

• Προετοιμασία δειγμάτων για φασματογράφο υπερύθρων

  Ο προσδιορισμός του λόγου ¹³C/¹²C στο διοξείδιο του άνθρακα των δειγμάτων αναπνοής γίνεται απευθείας στα αέρια αναπνοής. Τα αέρια αναπνοής εισάγονται από τις σακούλες δείγματος στο φασματογράφο NDIR μέσω μιας μεταβαλλόμενης αεραντλίας. Το νερό που εμπεριέχεται στο δείγμα αναπνοής κρατείται σταθερό κατά το μεγαλύτερο μέρος με χρήση μιας παγίδας νερού Nafion. Κατά ^{τη ρύθμιση και τη μέτρηση απαιτείται η ύπαρξη ενός αερίου χωρίς CO}2 ^{(μηδενικό αέριο ή zero-gas), το οποίο παράγεται με τη βοήθεια μιας ενσωματωμένης μονάδας απορρόφησης CO}2^.

• Ανάλυση με φασματογράφο υπερύθρων

  Για την ανάλυση του διοξειδίου του άνθρακα στα αέρια αναπνοής, μια δέσμη υπέρυθρης ακτινοβολίας ευρείας ζώνης παράγεται από πηγή υπέρυθρης ακτινοβολίας. Η δέσμη αυτή με τη χρήση ενός οπτικού διαιρέτη στέλνεται εναλλακτικά διαμέσου των αερίων του θαλάμου μέτρησης και του θαλάμου αναφοράς. Οι διαμορφωμένες υπέρυθρες ακτίνες που προκύπτουν εισέρχονται στη συνέχεια

  στους ανιχνευτές υπερύθρων, που είναι ανιχνευτές μετάδοσης διπλού στρώματος με ένα εμπρός και ένα πίσω θάλαμο, που περιέχουν ένα από τα ισοτοπικά αμιγή αέρια (¹³CO2 και ¹²CO2, αντίστοιχα) προς μέτρηση. Η υπέρυθρη ακτινοβολία στο θάλαμο μέτρησης υφίσταται εξασθένηση από το αέριο. Έτσι διαταράσσεται η ισοδυναμία μεταξύ των ακτινοβολιών μέτρησης και αναφοράς. Σαν συνέπεια, εμφανίζεται μια διακύμανση της θερμοκρασίας που με τη σειρά της προκαλεί διακύμανση της πίεσης στον εμπρός θάλαμο του ανιχνευτή υπερύθρων. Σε αυτό το θάλαμο προσαρμόζεται ένας πυκνωτής μεμβράνης, που υποβάλλεται σε υψηλή συνεχή τάση και μετασχηματίζει αυτές τις διακυμάνσεις πίεσης σε μια μεταβαλλόμενη τάση, που αποτελεί και το μέτρο της ισοτοπικής σύνθεσης του διοξειδίου του άνθρακα της αναπνοής.

• Εισαγωγή δείγματος

  Με τη βοήθεια ενός ημι-αυτόματου συστήματος εισαγωγής δείγματος, το προς μέτρηση αέριο εισάγεται σε συγκεκριμένες ποσότητες στο μηδενικό αέριο που κυκλοφορεί στο κύκλωμα αερίων του φασματογράφου υπερύθρων. Με τον τρόπο αυτό είναι δυνατή η μέτρηση του

• Προδιαγραφές για προσδιορισμό των λόγων ¹³C/¹²C

  Η αρχή της δοκιμασίας αναπνοής βασίζεται στη χορήγηση από το στόμα μιας ειδικής ουρίας με άτομα ¹³C, της οποίας η ενζυματική υδρόλυση παρακολουθείται με μέτρηση των μορίων ¹³CO2 στα αέρια της εκπνοής με χρήση φασματογραφίας υπερύθρων μη-διασποράς.

  Οι φασματογράφοι υπερύθρων για ανάλυση των αερίων αναπνοής πρέπει να τηρούν τις εξής προδιαγραφές:

  Πολλαπλές επαναληπτικές αναλύσεις: Τουλάχιστον τρεις επαναληπτικές αναλύσεις στο ένα και ίδιο

  δείγμα κατά τη λειτουργία

  Ασφάλεια πρόσβασης: Αποθήκευση των παραμέτρων λειτουργίας και των αποτελεσμάτων με

  ασφάλεια πρόσβασης ώστε να αποφεύγεται τροποποίησή τους στη συνέχεια

  Για την επαλήθευση των προδιαγραφών, η συσκευή πρέπει να ελεγχθεί ως προς τη γραμμικότητα, σταθερότητα και ακρίβεια μέτρησης.

  Ρύθμιση της μηδενικής ένδειξης των ανιχνευτών μέσω του «μηδενικού αερίου» που παράγεται στο φασματογράφο. Ρύθμιση της μέγιστης ένδειξης των ανιχνευτών μέσω των αερίων ρύθμισης με επακριβώς γνωστή συγκέντρωση.

  Γραμμικότητα: ≤ 0.5‰ για δείγματα αναπνοής με συγκέντρωση CO² μεταξύ 1% και

  7%

  Σταθερότητα: ≤ 0.3‰ σε 10 διαδοχικούς παλμούς

  Ακρίβεια μέτρησης: ≤ 0.5‰ για ¹³C σε φυσική ισοτοπική αφθονία χρησιμοποιώντας

  σακούλα 100ml δείγματος αναπνοής με συγκέντρωση CO2 3%

  Διαπιστώνεται λοίμωξη από βακτηρίδια Helicobacter pylori, αν η διαφορά του λόγου ¹³C/¹²C μεταξύ της αρχικής τιμής και της τιμής «30 λεπτών» υπερβαίνει το ποσοστό 4,0‰.

  Εναλλακτικά, μπορεί να χρησιμοποιηθεί οποιαδήποτε άλλη κατάλληλη έγκυρη μέθοδος, που εφαρμόζεται από ένα αντικειμενικά πιστοποιημένο εργαστήριο.

  Φασματογραφία μάζας (IRMS)

  Τα δείγματα αναπνοής που συλλέγονται σε γυάλινα ή πλαστικά δοχεία των 10 ml ή σε αναπνευστικές σακούλες των 100ml, αναλύονται με τη μέθοδο της φασματογραφίας μάζας λόγου ισοτόπων (Isotope Ratio Mass Spectrometry ή IRMS).

  Η ανάλυση του λόγου ¹³C/¹²C στο διοξείδιο του άνθρακα της εκπνοής είναι ένα αναπόσπαστο μέρος του διαγνωστικής δοκιμασίας του Helicobacter Test INFAI. Η ακρίβεια της δοκιμασίας εξαρτάται σε

  μεγάλο βαθμό από την ποιότητα ανάλυσης των αερίων εκπνοής. Οι προδιαγραφές των παραμέτρων του φασματογράφου μάζας, όπως γραμμικότητα, σταθερότητα (ακρίβεια αερίου αναφοράς) και ακρίβεια μέτρησης είναι θεμελιώδη για την ακρίβεια του συστήματος.

  Πρέπει να διασφαλιστεί ότι η ανάλυση πραγματοποιείται σε εξειδικευμένα εργαστήρια. Η μέθοδος αξιολόγησης της εφαρμογής έχει ως ακολούθως:

• Προετοιμασία δειγμάτων για IRMS

  Για τον προσδιορισμό του λόγου ¹³C/¹²C στο διοξείδιο του άνθρακα της εκπνοής με φασματογράφο μάζας, το διοξείδιο του άνθρακα πρέπει να διαχωριστεί από τα αέρια εκπνοής και να εισαχθεί στο φασματογράφο μάζας. Το σύστημα αυτόματης προετοιμασίας για φασματογράφο μάζας ισοτόπων, σχεδιασμένο ειδικά για ανάλυση δειγμάτων αναπνοής, βασίζεται σε διαχωρισμό με αεριο-χρωματογραφική τεχνική συνεχούς ροής.

  Το νερό απομακρύνεται από το δείγμα μέσω μιας παγίδας νερού Nafion ή μέσω αεριο-χρωματογραφικού συστήματος προετοιμασίας που διαχωρίζει τα διαφορετικά αέρια σε μια χρωματογραφική στήλη αερίων με έκλουση με Ήλιο. Με τη διέλευσή τους από τη στήλη, τα διαχωρισθέντα είδη αερίων της αναπνοής ανιχνεύονται από έναν ανιχνευτή ιονισμού. Η ποσότητα του αερίου διοξειδίου του άνθρακα, που προσδιορίζεται από το χαρακτηριστικό χρόνο κατακράτησής του, εισάγεται στο φασματογράφο μάζας.

• Ανάλυση φασματογράφου μάζας

  Για να γίνει ανάλυση του διαχωρισθέντος δείγματος αερίου διοξειδίου του άνθρακα, τα μόρια του δείγματος πρέπει να ιονισθούν, να σχηματίσουν μια δέσμη, να επιταχυνθούν σε ηλεκτρικό πεδίο, να παρεκτραπούν σε μαγνητικό πεδίο και τελικά να γίνει ανίχνευσή τους. Αυτές οι πέντε διαδικασίες συμβαίνουν στον αναλυτή του φασματογράφου μάζας, που αποτελείται από τρία χωριστά τμήματα: την πηγή, το σωλήνα διέλευσης, και το συλλέκτη. Ο ιονισμός, η διαμόρφωση της δέσμης και η επιτάχυνση συμβαίνουν όλα στην πηγή, η μαγνητική παρεκτροπή συμβαίνει στο σωλήνα διέλευσης και η ανίχνευση συμβαίνει στο συλλέκτη.

• Εισαγωγή δείγματος

  Για την εισαγωγή του διοξειδίου του άνθρακα στον αναλυτή, υπάρχουν διαθέσιμα πολλά συστήματα εισαγωγής δείγματος. Για την ανάλυση δείγματος αναπνοής, είναι ουσιώδης η χωριστή ισοστάθμιση του διοξειδίου του άνθρακα του δείγματος ως προς ένα πρότυπο αέριο αναφοράς. Με τον τρόπο αυτό διασφαλίζεται η υψηλή ακρίβεια του συστήματος αυτού, καθώς ο υπολογισμός του περιεχομένου ισοτόπων στο διοξείδιο του άνθρακα γίνεται σε σχέση με ένα ανεξάρτητο πρότυπο.

• Προδιαγραφές για τον προσδιορισμό του λόγου ¹³C/¹²C

  Η αρχή της δοκιμασίας αναπνοής βασίζεται στη χορήγηση από το στόμα μιας ειδικής ουρίας με άτομα ¹³C της οποίας τα αποτελέσματα μεταβολισμού παρακολουθούνται με μέτρηση των μορίων ¹³CO2 στα αέρια της εκπνοής.

• Ο φασματογράφος μάζας πρέπει να έχει τις εξής δυνατότητες:

  Πολλαπλή επαναληπτική ανάλυση: Τουλάχιστον 3 επαναληπτικές αναλύσεις στο ίδιο δείγμα κατά

  τη λειτουργία

  Ασφάλεια πρόσβασης: Αποθήκευση των παραμέτρων λειτουργίας και των

  αποτελεσμάτων με ασφάλεια πρόσβασης ώστε να αποφεύγεται τροποποίησή τους στη συνέχεια

  Ρύθμιση: Λόγος ¹³C/¹²C σε σχέση με PDB (Pee Dee Beliminate)

  Βρόχος δείγματος: < 200 µl

  Οι κύριες δοκιμές για την επαλήθευση των προδιαγραφών είναι γραμμικότητα, σταθερότητα (ακρίβεια αερίου αναφοράς) και ακρίβεια μέτρησης.

• Όλοι οι φασματογράφοι μάζας για ανάλυση των αερίων αναπνοής πρέπει να τηρούν τις εξής προδιαγραφές:

Γραμμικότητα: ^≤ 0,5‰ για δείγματα αναπνοής με συγκέντρωση CO2 μεταξύ

1 % και 7 %

Σταθερότητα: ≤ 0,2 ‰ σε 10 διαδοχικούς παλμούς

Ακρίβεια μέτρησης: ≤ 0,3 ‰ για ¹³C σε φυσική ισοτοπική αφθονία χρησιμοποιώντας δοχείο δείγματος αναπνοής 10ml με ^{συγκέντρωση CO}2 ^{3 % στην αναπνοή}

Διαπιστώνεται λοίμωξη από βακτηρίδια Helicobacter pylori, αν η διαφορά του λόγου ¹³C/¹²C μεταξύ της αρχικής τιμής και της τιμής «30 λεπτών» υπερβαίνει το ποσοστό 4,0‰.

Εναλλακτικά, μπορεί να χρησιμοποιηθεί οποιαδήποτε άλλη κατάλληλη έγκυρη μέθοδος, που εφαρμόζεται από ένα αντικειμενικά πιστοποιημένο εργαστήριο.