Helicobacter Test INFAI für Kinder im Alter von 3-11 45 mg Pulver zur Herstellung einer Lösung zum Einnehmen

Pharmakotherapeutische Gruppe: Andere Diagnostika, ATC-Code: VO4CX

Für eine Menge von 45 mg ¹³C-Harnstoff, die als Einzeldosis beim Atemtest verabreicht wird, ist keine pharmakodynamische Aktivität beschrieben.

Nach der oralen Verabreichung erreicht der markierte Harnstoff die Magenmukosa. In Anwesenheit von Helicobacter pylori wird der ¹³C-Harnstoff durch das Urease-Enzym des Helicobacter pylori metabolisiert.

2H2N(¹³CO)NH2 + 2H2 O ^{Enzym: Urease} 4NH3 + 2¹³CO2

Kohlendioxid diffundiert in die Blutgefäße. Von dort wird es als Bikarbonat in die Lungen transportiert und dann als ¹³CO2 ausgeatmet.

In Anwesenheit von bakterieller Urease ist das Verhältnis der ¹³C/¹²C-Kohlenstoffisotope signifikant ^{verändert. Die in den Atemluftproben enthaltene Menge13CO}2 ^{wird mit Hilfe der Isotopen-Verhältnis-}Massen-Spektrometrie (IRMS) bestimmt und als absolutes Verhältnis (𝚫ᵝ-Wert) zwischen dem

00-Minuten- und dem 30-Minuten-Wert angegeben.

Urease wird im Magen ausschließlich von Helicobacter pylori gebildet. Andere Urease-produzierende Bakterien konnten in der Magenflora nur selten nachgewiesen werden.

Der Grenzwert zur Unterscheidung von Helicobacter pylori-negativen und positiven Patienten ist als

𝚫ᵝ-Wert von 4 ‰ festgelegt. Dies bedeutet, dass ein Anstieg des 𝚫ᵝ-Wertes um mehr als 4 ‰ eine Infektion anzeigt. Im Vergleich zu bioptischen Diagnostika zum Nachweis einer Infektion mit Helicobacter pylori, erreicht der Atemtest in einer klinischen Studie bei 168 Patienten im Alter von 3 bis 11 eine Sensitivität von 98,4 % [90 %-CI: > 93,9 % ] und eine Spezifität von 98,1 % [90 %-CI:

> 95,1 %].

Bei Abwesenheit bakterieller Urease wird der gesamte verabreichte Harnstoff nach Resorption durch den Gastrointestinaltrakt wie endogener Harnstoff metabolisiert. Der aufgrund der oben beschriebenen bakteriellen Hydrolyse gebildete Ammoniak wird in Form von NH4⁺ in den Stoffwechsel aufgenommen.

Der oral applizierte ¹³C-Harnstoff wird zu Kohlendioxid und Ammoniak metabolisiert oder wird in den körpereigenen Harnstoff-Zyklus integriert. Jeder Anstieg von ¹³CO2 wird mit der Isotopen-Analyse gemessen.

Absorption und Distribution von ¹³CO2 ist schneller als die Urease-Reaktion. Die Spaltung des

13C-Harnstoffs durch die Helicobacter-Urease ist deshalb der geschwindigkeitsbestimmende Schritt

des gesamten Prozesses.

Nur bei Helicobacter pylori-positiven Patienten führt die Verabreichung von 45 mg markiertem Harnstoff innerhalb der ersten 30 Minuten zu einem wesentlichen Anstieg von ¹³CO2 in der Atemluftprobe.

Keine.

Nicht zutreffend.

3 Jahre.

Nicht über 25°C lagern.

Ein Test-Kit enthält folgende Bestandteile:

und sonstige Hinweise zur Handhabung

1. Der Test soll in Anwesenheit einer fachlich qualifizierten Person durchgeführt werden.

2. Jeder Patient ist entsprechend dem mitgelieferten Datenblatt zu dokumentieren. Es wird empfohlen, dass der Patient den Test in Ruhelage durchführt.

3. Der Test beginnt mit der Sammlung von Proben zur Bestimmung der Ausgangswerte (00-Minuten-Wert):

   • Den Strohhalm und die beiden Probenröhrchen mit der Aufschrift "Probenzeit: 00-Minuten-Wert" aus dem Testset nehmen.

   • Stopfen von einem der Probenröhrchen entfernen, den Strohhalm auswickeln und in das Behältnis halten.

   • Der Patient atmet nun behutsam durch den Strohhalm aus, bis die Innenwand des Probenröhrchens beschlägt.

   • Unter fortgesetztem Ausatmen muss der Patient den Strohhalm aus dem Proberöhrchen ziehen und das Röhrchen sofort mit dem Stopfen verschließen.

     (Falls das Probenröhrchen länger als 30 Sekunden geöffnet bleibt, kann das Testergebnis verfälscht sein.)

   • Das Probenröhrchen senkrecht halten und das Barcodeetikett "00-Minuten-Wert" so um das Probenröhrchen kleben, dass die Linien des Barcode in horizontaler Ebene verlaufen.

4. Das zweite Probenröhrchen (Aufschrift: "Probenzeit: 00-Minuten-Wert") mit Atem füllen, in dem man nach dem gleichen Prozedere vorgeht.

5. Nun müssen vom Patienten unverzüglich 100 ml 100%iger Orangensaft ohne Unterbrechung getrunken werden.

6. Jetzt folgt die Herstellung der Testlösung:

   • Das Weithalsgefäß mit der Aufschrift “¹³C-Harnstoff-Pulver“ wird aus dem Testset entnommen, geöffnet und zu etwa dreiviertel seines Volumens mit Trinkwasser gefüllt.

   • Das Weithalsgefäß schließen und vorsichtig schütteln, bis das Pulver ganz gelöst ist. Den Inhalt in ein Trinkglas gießen.

   • Das ¹³C-Harnstoff Weithalsgefäß noch ein zweites und drittes Mal bis zum Rand mit Wasser füllen und den Inhalt jeweils in das Trinkglas gießen (die Gesamtmenge an Trinkwasser sollte ungefähr 30 ml betragen).

7. Diese Testlösung muss nun sofort vom Patienten getrunken werden und die Einnahmezeit muss festgehalten werden.

8. 30 Minuten nach der Einnahme der Testlösung (Punkt 7) werden die "30-Minuten-Wert"-Proben in den beiden in der Packung verbliebenen Behältnissen (Aufschrift: "Probenzeit: 30-Minuten-Wert") wie unter Schritt 3 und 4 beschrieben, gesammelt. Man benutzt die Barcodeetiketten "30-Minuten-Wert" für diese Proben.

9. Das vorgesehene Barcodeetikett auf das Datenblatt zur Patientendokumentation kleben. Nach Beendigung des Tests wird die Packung mit dem vorgesehenen Aufkleber verschlossen.

10. Die Probenröhrchen müssen dann in der Originalverpackung zu einem qualifizierten Labor zur Analyse geschickt werden.

    Analyse der Atemproben und Testspezifikationen für Labore

    Die in 10 ml Glas- oder Plastikprobenröhrchen gesammelten Atemproben werden mit einem Isotopen-Verhältnis-Massenspektrometer (IRMS) analysiert.

    Die Bestimmung des ¹³C/¹²C-Isotopenverhältnisses des Kohlendioxids der Atemproben ist ein integrierter Bestandteil des Testkits Helicobacter Test INFAI für Kinder im Alter von 3-11. Die Genauigkeit des Tests hängt entscheidend von der Qualität der Atemanalyse ab. Die Gerätespezifikationen des Massenspektrometers wie Linearität, Stabilität (Referenzgas-Präzision) und die Präzision der Messung sind für die Genauigkeit der Analyse von fundamentaler Bedeutung.

    Es muss sichergestellt sein, dass die Analyse von einem qualifizierten Labor durchgeführt wird. Die im Zulassungsantrag validierte Methode ist wie folgt beschrieben:

    • Probenvorbereitung für IRMS

      Zur massenspektrometrischen Bestimmung des ¹³C/¹²C-Verhältnisses im Kohlendioxid der Atemproben muss das Kohlendioxid aus der Probe isoliert und dem Massenspektrometer zugeführt werden. Das automatische Probenaufbereitungssystem des für die Analyse des Atemtests vorgeschriebenen Isotopenmassenspektrometers basiert auf einer gaschromatographischen Trennung mittels „Continuous-flow“-Technik.

      Das Wasser der Atemprobe wird durch eine Nafion-Wasserfalle oder durch das gaschromatographische System, welches die einzelnen gasförmigen Bestandteile mit Helium als Eluent auftrennt, entfernt. Die durch Auftrennung isolierten Gase der Atemluft werden durch einen Ionisierungsdetektor nachgewiesen. Das Kohlendioxid wird durch seine charakteristische Retentionszeit identifiziert und in das massenspektrometrische System überführt.

    • Massenspektrometrische Analyse

      Zur Analyse des isolierten Kohlendioxids werden die Gasmoleküle ionisiert, in einem Ionenstrahl gebündelt, in einem elektrischen Feld beschleunigt, in einem magnetischen Feld abgelenkt und aufgespalten und schließlich quantitativ erfasst. Diese fünf Schritte finden im so genannten Analysator des Massenspektrometers statt, der sich in die Bereiche Quelle, Flugrohr und Kollektor aufteilen lässt.

      Ionisation, Bündelung des Strahls und Beschleunigung geschehen in der Quelle, die magnetische Ablenkung erfolgt im Flugrohr, und im Kollektor werden die Isotopenbestandteile quantitativ nachgewiesen.

    • Probeneinlass

      Zum Einlass von Kohlendioxid in den Analysator sind mehrere Systeme denkbar. Für die Analyse von Atemproben ist der individuelle Abgleich des Kohlendioxids der Atemprobe zu einem Kohlendioxid-Referenz-Standardgas essentiell. Dieser Abgleich stellt die hohe Genauigkeit des Systems sicher, da die Berechnung des Isotopengehalts vom Kohlendioxid der Atemprobe direkt im Vergleich zu einem unabhängigen Standard erfolgt.

    • Spezifikationen der Bestimmung des ¹³C/¹²C-Verhältnisses

      Grundlage des Atemtests ist die Verabreichung eines spezifisch markierten ¹³C-Harnstoffs, dessen metabolischer Abbau durch die Messung von ¹³CO2 in der ausgeatmeten Luft wiedergegeben werden kann.

    • Das Massenspektrometer muss ausgestattet sein mit:

      Mehrfach-Reproduktion: Mindestens 3 Mehrfachanalysen einer Probe während der Messung Sicherheitsbeschränkung: Speicherung der Messparameter und Messergebnisse unter

      Zugangsbeschränkung, zur Unterbindung von nachträglichen

      Manipulationen

      Justierung: ¹³C/¹²C-Verhältnis im Vergleich zu Pee Dee Beliminate (PDB)

      Probenvolumen: < 200 µl

      Die Einhaltung der Spezifikationen wird durch Tests zur Linearität, Stabilität (Referenzgas-Präzision) und zur Präzision der Messung überprüft.

    • Alle Massenspektrometer, die zur Analyse der Atemproben eingesetzt werden, müssen die folgenden Spezifikationen erfüllen:

Linearität: ^≤ 0,5 ‰ bei Atemproben mit CO2-Konzentrationen zwischen 1 % und 7 %

Stabilität: ≤ 0,2 ‰ bei 10 aufeinander folgenden Messungen Präzision der Messung: ≤ 0,3 ‰ bei ¹³C in natürlicher Häufigkeit in 10 ml

Atemprobenröhrchen mit 3 % CO2-Atemkonzentration in der Probe

Eine Helicobacter pylori-Infektion ist nachgewiesen, wenn die Differenz von ¹³C/¹²C des Ausgangswertes und des 30-Minuten-Wertes 4,0 ‰ übersteigt.

Alternativ können alle weiteren validierten Methoden in qualifizierten Labors angewendet werden.